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分析糖原合成酶激酶(GSK3β)抗體的效能及樣本處理要求
  • 釋出日期▩↟│▩:2019-11-14      瀏覽次數▩↟│▩:753
    •   糖原合成酶激酶(GSK3β)抗體的實驗原理▩↟│▩:
        試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)·☁•。往預先包被人糖原合成酶激酶3β(GSK3β)捕獲抗體的包被微孔中•╃▩↟╃,依次加入標本✘▩•↟↟、標準品✘▩•↟↟、HRP標記的檢測抗體•╃▩↟╃,經過溫育並*洗滌·☁•。用底物TMB顯色•╃▩↟╃,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色•╃▩↟╃,並在酸的作用下轉化成終的黃色·☁•。顏色的深淺和樣品中的人糖原合成酶激酶3β(GSK3β)呈正相關·☁•。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)•╃▩↟╃,計算樣品濃度·☁•。
       
        糖原合成酶激酶(GSK3β)抗體的效能特點▩↟│▩:
        1✘▩•↟↟、檢測範圍▩↟│▩:0.25ng/mL–8ng/mL·☁•。
        2✘▩•↟↟、靈敏度▩↟│▩:低檢測濃度小於0.1ng/mL·☁•。
        3✘▩•↟↟、特異性▩↟│▩:不與其它可溶性結構類似物交叉反應·☁•。
        4✘▩•↟↟、重複性▩↟│▩:板內變異係數小於10%•╃▩↟╃,板間變異係數小於15%·☁•。
       
        樣本處理及要求▩↟│▩:
        1✘▩•↟↟、血清▩↟│▩:全血標本請於室溫放置2小時或4℃過夜後於1000g離心20分鐘•╃▩↟╃,取上清即可檢測•╃▩↟╃,或將標本放於-20℃或-80℃儲存•╃▩↟╃,但應避免反覆凍融·☁•。
        2✘▩•↟↟、血漿▩↟│▩:可用EDTA或肝素作為抗凝劑•╃▩↟╃,標本採集後30分鐘內於2-8°C1000g離心20分鐘•╃▩↟╃,或將標本放於-20℃或-80℃儲存•╃▩↟╃,但應避免反覆凍融·☁•。
        3✘▩•↟↟、組織勻漿▩↟│▩:用預冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織•╃▩↟╃,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果)•╃▩↟╃,稱重後將組織剪碎·☁•。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比•╃▩↟╃,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS•╃▩↟╃,具體體積可根據實驗需要適當調整•╃▩↟╃,並做好記錄·☁•。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中•╃▩↟╃,於冰上充分研磨·☁•。為了進一步裂解組織細胞•╃▩↟╃,可以對勻漿液進行超聲破碎•╃▩↟╃,或反覆凍融·☁•。後將勻漿液於5000×g離心5~10分鐘•╃▩↟╃,取上清檢測·☁•。
        4✘▩•↟↟、細胞培養物上清或其它生物標本▩↟│▩:1000g離心20分鐘•╃▩↟╃,取上清即可檢測•╃▩↟╃,或將標本放於-20℃或-80℃儲存•╃▩↟╃,但應避免反覆凍融·☁•。
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