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人膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)酶聯免疫檢測

點選次數◕│₪↟:920 釋出時間◕│₪↟:2019/4/4
提 供 商◕│₪↟: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小◕│₪↟:
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人膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)酶聯免疫檢測

          試劑盒使用說明書                                      AE91118Hu  

使用前仔細閱讀本說明書☁·╃│•。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理▩│✘↟,來檢測人膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)▩│✘↟,只能用於研究用途▩│✘↟,不得用於醫學診斷☁·╃│•。

用  途◕│₪↟:用於人血清☁₪、血漿及相關液體樣本中膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)        測定☁·╃│•。

工作原理◕│₪↟:

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)水平☁·╃│•。向預先包被了膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)克隆抗體的酶標孔中加入膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)▩│✘↟,溫育;溫育後▩│✘↟,加入生物素標記的抗ANXA2 AB抗體☁·╃│•。再與鏈黴親和素-HRP結合▩│✘↟,形成免疫複合物▩│✘↟,再經過溫育和洗滌▩│✘↟,去除未結合的酶▩│✘↟,然後加入底物A☁₪、B▩│✘↟,產生藍色▩│✘↟,並在酸的作用下轉化成終的黃色☁·╃│•。顏色的深淺與樣品中膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)的濃度呈正相關☁·╃│•。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品◕│₪↟:720μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗ANXA2 AB抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材◕│₪↟:

  1. 37℃恆溫箱☁·╃│•。
  2. 標準規格酶標儀☁·╃│•。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水▩│✘↟,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

 

注意事項◕│₪↟:

  1. 從2-8℃取出的試劑盒▩│✘↟,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘☁·╃│•。酶標包被板開封后如未用完▩│✘↟,板條應裝入密封袋中儲存☁·╃│•。
  2. 各步加樣均應使用加樣器▩│✘↟,並經常校對其準確性▩│✘↟,以避免試驗誤差
  3. 嚴格按照說明書的操作進行▩│✘↟,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  4. 為避免交叉汙染▩│✘↟,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜☁·╃│•。
  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好☁·╃│•。不同批號的試劑不要混用☁·╃│•。保質前使用☁·╃│•。
  6. 底物B對光敏感▩│✘↟,避免長時間暴露於光下☁·╃│•。

 

洗板方法◕│₪↟:

手工洗板方法◕│₪↟:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙▩│✘↟,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內▩│✘↟,浸泡1-2分鐘☁·╃│•。根據需要▩│✘↟,重複此過程數次☁·╃│•。

自動洗板◕│₪↟:如果有自動洗板機▩│✘↟,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求◕│₪↟:

1不能檢測含NaN3的樣品▩│✘↟,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性☁·╃│•。

2.標本採集後儘早進行提取▩│✘↟,提取按相關文獻進行▩│✘↟,提取後應儘快進行實驗☁·╃│•。若不能馬上進行試驗▩│✘↟,可將標本放於-20℃儲存▩│✘↟,但應避免反覆凍融☁·╃│•。

 

操作程式◕│₪↟:

  1. 標準品的稀釋◕│₪↟:(本試劑盒提供原倍標準品一支▩│✘↟,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋☁·╃│•。)

360μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

180μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

90μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

45μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

22.5μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  1. 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數☁·╃│•。每個標準品和空白孔建議做復孔☁·╃│•。每個樣品根據自己的數量來定▩│✘↟,能使用復孔的儘量做復孔☁·╃│•。
  2. 加樣◕│₪↟:1)空白孔▩│✘↟,空白對照孔不加樣品▩│✘↟,生物素標記的抗ANXA2 AB抗體▩│✘↟,鏈黴親和素-HRP▩│✘↟,只加顯色劑A&B和終止液▩│✘↟,其餘各步操作相同;2)標準品孔◕│₪↟:加入標準品50ul▩│✘↟,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體▩│✘↟,故不加);3)代測樣品孔◕│₪↟:加入樣本40ul▩│✘↟,然後各加入抗ANXA2 AB抗體10ul☁₪、鏈黴親和素-HRP50ul▩│✘↟,蓋上封板膜▩│✘↟,輕輕震盪混勻▩│✘↟,37℃溫育60分鐘☁·╃│•。
  3. 配液◕│₪↟:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用☁·╃│•。
  4. 洗滌◕│₪↟:小心揭掉封板膜▩│✘↟,棄去液體▩│✘↟,甩幹▩│✘↟,每孔加滿洗滌液▩│✘↟,靜置30秒後棄去▩│✘↟,如此重複5次▩│✘↟,拍幹☁·╃│•。
  5. 顯色◕│₪↟:每孔先加入顯色劑A50ul▩│✘↟,再加入顯色劑B50μl▩│✘↟,輕輕震盪混勻▩│✘↟,37℃避光顯色15分鐘.
  6. 終止◕│₪↟:每孔加終止液50μl▩│✘↟,終止反應(此時藍色立轉黃色)☁·╃│•。
  7. 測定◕│₪↟:以空白空調零▩│✘↟,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)☁·╃│•。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行☁·╃│•。
  8. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程▩│✘↟,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度☁·╃│•。也可以使用各種應用軟體來計算☁·╃│•。

 

操作程式總結◕│₪↟:

檢測範圍◕│₪↟:12μg/L -380μg/L

 

儲存◕│₪↟:2-8℃☁·╃│•。

有效期◕│₪↟:6個月(2-8℃)☁·╃│•。

 
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