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大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)酶聯免疫檢測

點選次數✘₪╃☁:845 釋出時間✘₪╃☁:2019/4/19
提 供 商✘₪╃☁: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小✘₪╃☁:
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大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)酶聯免疫檢測

試劑盒使用說明書

                                                               AE98606G

使用前仔細閱讀本說明書·│✘╃。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理☁╃,來檢測大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)☁╃,只能用於研究用途☁╃,不得用於醫學診斷·│✘╃。

   ✘₪╃☁:用於測定植物組織☁╃,細胞及其它相關樣本中大豆11S伴球蛋白(11S-        conglycinin)含量測定·│✘╃。

工作原理:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)水平·│✘╃。向預先包被了大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)單克隆抗體的酶標孔中加入大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)☁╃,溫育;溫育後☁╃,加入生物素標記的抗11S-conglycinin抗體·│✘╃。再與鏈黴親和素-HRP結合☁╃,形成免疫複合物☁╃,再經過溫育和洗滌☁╃,去除未結合的酶☁╃,然後加入底物A▩▩•、B☁╃,產生藍色☁╃,並在酸的作用下轉化成終的黃色·│✘╃。顏色的深淺與樣品中大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)的濃度呈正相關·│✘╃。

 

試劑盒組成: 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品✘₪╃☁:800 ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗11S-conglycinin抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材:

  • 37恆溫箱·│✘╃。
  • 標準規格酶標儀·│✘╃。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水☁╃,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項:

  • 從2-8℃取出的試劑盒☁╃,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘·│✘╃。酶標包被板開封后如未用完☁╃,板條應裝入密封袋中儲存·│✘╃。
  • 各步加樣均應使用加樣器☁╃,並經常校對其準確性☁╃,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行☁╃,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染☁╃,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜·│✘╃。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好·│✘╃。不同批號的試劑不要混用·│✘╃。保質前使用·│✘╃。
  • 底物B對光敏感☁╃,避免長時間暴露於光下·│✘╃。

 

洗板方法:

手工洗板方法✘₪╃☁:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙☁╃,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內☁╃,浸泡1-2分鐘·│✘╃。根據需要☁╃,重複此過程數次·│✘╃。

自動洗板✘₪╃☁:如果有自動洗板機☁╃,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求 :

1.不能檢測含NaN3的樣品☁╃,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性·│✘╃。

2.標本採集後儘早進行提取☁╃,提取按相關文獻進行☁╃,提取後應儘快進行實驗·│✘╃。若不能馬上進行試驗☁╃,可將標本放於-20℃儲存☁╃,但避免反覆凍融·│✘╃。

 

操作程式:

  • 標準品的稀釋✘₪╃☁:(本試劑盒提供原倍標準品一支☁╃,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋·│✘╃。)

400ng/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

200ng/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

100ng/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

50ng/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

25ng/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  •  根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數·│✘╃。每個標準品和空白孔建議做復孔·│✘╃。每個樣品根據自己的數量來定☁╃,能使用復孔的儘量做復孔·│✘╃。
  • 加樣✘₪╃☁:
  • 1)空白孔☁╃,空白對照孔不加樣品☁╃,生物素標記的抗11S- conglycinin   抗體☁╃,鏈黴親和素-HRP☁╃,只加顯色劑A&B和終止液,其餘各步操作相   同;
  • 2)標準品孔✘₪╃☁:加入標準品50ul☁╃,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已     事先整合好生物素抗體☁╃,故不加);
  • 3)待測樣品孔✘₪╃☁:加入樣本40ul☁╃,然後各加入抗11S-conglycinin抗     體10ul▩▩•、鏈黴親和素-HRP50ul☁╃,蓋上封板膜☁╃,輕輕震盪混勻☁╃,     37℃溫育60分鐘·│✘╃。 
  • 配液✘₪╃☁:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用·│✘╃。
  • 洗滌✘₪╃☁:小心揭掉封板膜☁╃,棄去液體☁╃,甩幹☁╃,每孔加滿洗滌液☁╃,靜置30     秒後棄去☁╃,如此重複5次☁╃,拍幹·│✘╃。
  • 顯色✘₪╃☁:每孔先加入顯色劑A50ul☁╃,再加入顯色劑B50μl☁╃,輕輕震盪混     勻☁╃,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止✘₪╃☁:每孔加終止液50μl☁╃,終止反應(此時藍色立轉黃色)·│✘╃。
  • 測定✘₪╃☁:以空白空調零☁╃,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD         值)·│✘╃。測定應在加終止液後10分鐘以內進行·│✘╃。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程☁╃,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度·│✘╃。也可以使用各種應用軟體來計算·│✘╃。

 

操作程式總結✘₪╃☁:

 

 

檢測範圍✘₪╃☁:15ng/L -400 ng/L

保 存✘₪╃☁:2-8·│✘╃。

有效期✘₪╃☁:6個月(2-8℃)·│✘╃。

 
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