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大鼠dickkopf(DKK1)酶聯免疫檢測

點選次數✘↟╃:549 釋出時間✘↟╃:2019/5/10
提 供 商✘↟╃: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小✘↟╃:
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大鼠dickkopf(DKK1)酶聯免疫

      檢測試劑盒使用說明書         AE91909Ra

使用前仔細閱讀本說明書✘↟。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理◕✘│☁,來檢測大鼠dickkopf(DKK1)◕✘│☁,只能用於研究用途◕✘│☁,不得用於醫學診斷✘↟。

  ✘↟╃:用於大鼠血清▩·↟◕、血漿及相關液體樣本中dickkopf(DKK1)測定✘↟。

工作原理:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠dickkopf(DKK1)水平✘↟。向預先包被了大鼠dickkopf(DKK1)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠dickkopf(DKK1)◕✘│☁,溫育;溫育後◕✘│☁,加入生物素標記的抗DKK1抗體✘↟。再與鏈黴親和素-HRP結合◕✘│☁,形成免疫複合物◕✘│☁,再經過溫育和洗滌◕✘│☁,去除未結合的酶◕✘│☁,然後加入底物A▩·↟◕、B◕✘│☁,產生藍色◕✘│☁,並在酸的作用下轉化成終的黃色✘↟。顏色的深淺與樣品中大鼠dickkopf(DKK1)的濃度呈正相關✘↟。

 

試劑盒組成: 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品24μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗DKK1抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材:

  • 37恆溫箱✘↟。
  • 標準規格酶標儀✘↟。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水◕✘│☁,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項:

  • 從2-8℃取出的試劑盒◕✘│☁,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘✘↟。酶標包被板開封后如未用完◕✘│☁,板條應裝入密封袋中儲存✘↟。
  • 各步加樣均應使用加樣器◕✘│☁,並經常校對其準確性◕✘│☁,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行◕✘│☁,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染◕✘│☁,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜✘↟。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好✘↟。不同批號的試劑不要混用✘↟。保質前使用✘↟。
  • 底物B對光敏感◕✘│☁,避免長時間暴露於光下✘↟。

 

洗板方法:

手工洗板方法✘↟╃:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙◕✘│☁,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內◕✘│☁,浸泡1-2分鐘✘↟。根據需要◕✘│☁,重複此過程數次✘↟。

自動洗板✘↟╃:如果有自動洗板機◕✘│☁,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求: 

1.不能檢測含NaN3的樣品◕✘│☁,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性✘↟。

2.標本採集後儘早進行提取◕✘│☁,提取按相關文獻進行◕✘│☁,提取後應儘快進行實驗✘↟。若不能馬上進行試驗◕✘│☁,可將標本放於-20℃儲存◕✘│☁,但避免反覆凍融✘↟。

 

操作程式:

  • 標準品的稀釋✘↟╃:(本試劑盒提供原倍標準品一支◕✘│☁,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋✘↟。)

12μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

6μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

3μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

1.5μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

0.75μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數✘↟。每個標準品和空 白孔建議做復孔✘↟。每個樣品根據自己的數量來定◕✘│☁,能使用復孔的儘量做復孔✘↟。
  • 加樣✘↟╃:1)空白孔◕✘│☁,空白對照孔不加樣品◕✘│☁,生物素標記的抗DKK1抗體◕✘│☁,鏈黴親和素-HRP◕✘│☁,只加顯色劑A&B和終止液◕✘│☁,其餘各步操作相同;2)標準品孔✘↟╃:加入標準品50ul◕✘│☁,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體◕✘│☁,故不加);3)代測樣品孔✘↟╃:加入樣本40ul◕✘│☁,然後各加入抗DKK1抗體10ul▩·↟◕、鏈黴親和素-HRP50ul◕✘│☁,蓋上封板膜◕✘│☁,輕輕震盪混勻◕✘│☁,37℃溫育60分鐘✘↟。 
  • 配液✘↟╃:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用✘↟。
  • 洗滌✘↟╃:小心揭掉封板膜◕✘│☁,棄去液體◕✘│☁,甩幹◕✘│☁,每孔加滿洗滌液◕✘│☁,靜置30秒後棄去◕✘│☁,如此重複5次◕✘│☁,拍幹✘↟。
  • 顯色✘↟╃:每孔先加入顯色劑A50ul◕✘│☁,再加入顯色劑B50μl◕✘│☁,輕輕震盪混勻◕✘│☁,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止✘↟╃:每孔加終止液50μl◕✘│☁,終止反應(此時藍色立轉黃色)✘↟。
  • 測定✘↟╃:以空白空調零◕✘│☁,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)✘↟。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行✘↟。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程◕✘│☁,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度✘↟。也可以使用各種應用軟體來計算✘↟。

 

操作程式總結✘↟╃:

 

試劑盒效能✘↟╃:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上✘↟。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍✘↟╃:

檢測範圍✘↟╃:0.5μg/L -13μg/L

 

儲存條件及有效期✘↟╃:

儲存✘↟╃:2-8✘↟。

有效期✘↟╃:6個月(2-8℃)✘↟。

 
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