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大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數▩•₪:644 釋出時間▩•₪:2019/6/6
提 供 商▩•₪: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小▩•₪:
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大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)酶聯免疫檢測  

     試劑盒使用說明書            AE91352TRa

使用前仔細閱讀本說明書╃☁·。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理│₪•·,來檢測大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)│₪•·,只能用於研究用途│₪•·,不得用於醫學診斷╃☁·。

用    途▩•₪:用於大鼠血清·₪▩₪│、血漿及相關液體樣本中α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)測定╃☁·。

工作原理

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)水平╃☁·。向預先包被了大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)│₪•·,溫育;溫育後│₪•·,加入生物素標記的抗E抗體╃☁·。再與鏈黴親和素-HRP結合│₪•·,形成免疫複合物│₪•·,再經過溫育和洗滌│₪•·,去除未結合的酶│₪•·,然後加入底物A·₪▩₪│、B│₪•·,產生藍色│₪•·,並在酸的作用下轉化成終的黃色╃☁·。顏色的深淺與樣品中大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的濃度呈正相關╃☁·。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品3200pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗E抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材

  1. 37℃恆溫箱╃☁·。
  2. 標準規格酶標儀╃☁·。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水│₪•·,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

 

注意事項

  1. 從2-8℃取出的試劑盒│₪•·,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘╃☁·。酶標包被板開封后如未用完│₪•·,板條應裝入密封袋中儲存╃☁·。
  2. 各步加樣均應使用加樣器│₪•·,並經常校對其準確性│₪•·,以避免試驗誤差
  3. 嚴格按照說明書的操作進行│₪•·,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  4. 為避免交叉汙染│₪•·,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜╃☁·。
  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好╃☁·。不同批號的試劑不要混用╃☁·。保質前使用╃☁·。
  6. 底物B對光敏感│₪•·,避免長時間暴露於光下╃☁·。

 

洗板方法

手工洗板方法▩•₪:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙│₪•·,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內│₪•·,浸泡1-2分鐘╃☁·。根據需要│₪•·,重複此過程數次╃☁·。

 

自動洗板▩•₪:如果有自動洗板機│₪•·,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求

1不能檢測含NaN3的樣品│₪•·,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性╃☁·。

2.標本採集後儘早進行提取│₪•·,提取按相關文獻進行│₪•·,提取後應儘快進行實驗╃☁·。若不能馬上進行試驗│₪•·,可將標本放於-20℃儲存│₪•·,但應避免反覆凍融╃☁·。

操作程式

  1. 標準品的稀釋▩•₪:(本試劑盒提供原倍標準品一支│₪•·,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋╃☁·。)

1600pg/ml

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

800pg/ml

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

400pg/ml

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

200pg/ml

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

100pg/ml

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

 2.根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數╃☁·。每個標準品和空白孔建議做復孔╃☁·。每個樣品根據自己的數量來定│₪•·,能使用復孔的儘量做復孔╃☁·。

 3.加樣▩•₪:1)空白孔│₪•·,空白對照孔不加樣品│₪•·,生物素標記的抗α-SMA抗體│₪•·,鏈黴親和素-HRP│₪•·,只加顯色劑A&B和終止液│₪•·,其餘各步操作相同;2)標準品孔▩•₪:加入標準品50ul│₪•·,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體│₪•·,故不加);3)代測樣品孔▩•₪:加入樣本40ul│₪•·,然後各加入抗α-SMA抗體10ul·₪▩₪│、鏈黴親和素-HRP50ul│₪•·,蓋上封板膜│₪•·,輕輕震盪混勻│₪•·,37℃溫育60分鐘╃☁·。

 4.配液▩•₪:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用╃☁·。

 5.洗滌▩•₪:小心揭掉封板膜│₪•·,棄去液體│₪•·,甩幹│₪•·,每孔加滿洗滌液│₪•·,靜置30秒後棄去│₪•·,如此重複5次│₪•·,拍幹╃☁·。

 6.顯色▩•₪:每孔先加入顯色劑A50ul│₪•·,再加入顯色劑B50μl│₪•·,輕輕震盪混勻│₪•·,37℃避光顯色15分鐘.

 7.終止▩•₪:每孔加終止液50μl│₪•·,終止反應(此時藍色立轉黃色)╃☁·。

 8.測定▩•₪:以空白空調零│₪•·,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)╃☁·。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行╃☁·。

 9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程│₪•·,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度╃☁·。也可以使用各種應用軟體來計算╃☁·。

 

操作程式總結▩•₪:

 

試劑盒效能▩•₪:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上╃☁·。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍▩•₪:

檢測範圍▩•₪:20pg/ml1600pg/ml╃☁·。

 

儲存條件及有效期▩•₪:

 

儲存▩•₪:2-8℃╃☁·。

有效期▩•₪:6個月(2-8℃)

 
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