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大鼠蛋白質修補同系物(PTCH)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數·▩•╃│:554 釋出時間·▩•╃│:2019/6/21
提 供 商·▩•╃│: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小·▩•╃│:
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大鼠蛋白質修補同系物(PTCH)酶聯免疫

     檢測試劑盒使用說明書        AE91758Ra

   使用前仔細閱讀本說明書✘↟。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理✘☁☁☁✘,來檢測大鼠蛋白質修補同系物(PTCH)✘☁☁☁✘,只能用於研究用途✘☁☁☁✘,不得用於醫學診斷✘↟。

   ·▩•╃│:用於大鼠血清✘╃、血漿及相關液體樣本中蛋白質修補同系物(PTCH)測定✘↟。

工作原理:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠蛋白質修補同系物(PTCH)水平✘↟。向預先包被了大鼠蛋白質修補同系物(PTCH)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠蛋白質修補同系物(PTCH)✘☁☁☁✘,溫育;溫育後✘☁☁☁✘,加入生物素標記的抗蛋白質修補同系物(PTCH)抗體✘↟。再與鏈黴親和素-HRP結合✘☁☁☁✘,形成免疫複合物✘☁☁☁✘,再經過溫育和洗滌✘☁☁☁✘,去除未結合的酶✘☁☁☁✘,然後加入底物A✘╃、B✘☁☁☁✘,產生藍色✘☁☁☁✘,並在酸的作用下轉化成終的黃色✘↟。顏色的深淺與樣品中大鼠蛋白質修補同系物(PTCH)的濃度呈正相關✘↟。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品1600 ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗PTCH抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材

  1. 37恆溫箱✘↟。
  2. 標準規格酶標儀✘↟。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水✘☁☁☁✘,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

 

注意事項

  1. 從2-8℃取出的試劑盒✘☁☁☁✘,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘✘↟。酶標包被板開封后如未用完✘☁☁☁✘,板條應裝入密封袋中儲存✘↟。
  2. 各步加樣均應使用加樣器✘☁☁☁✘,並經常校對其準確性✘☁☁☁✘,以避免試驗誤差
  3. 嚴格按照說明書的操作進行✘☁☁☁✘,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  4. 免交叉汙染✘☁☁☁✘,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜✘↟。
  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好✘↟。不同批號的試劑不要混用✘↟。保質前使用✘↟。
  6. 底物B對光敏感✘☁☁☁✘,避免長時間暴露於光下✘↟。

 

洗板方法

手工洗板方法·▩•╃│:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙✘☁☁☁✘,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內✘☁☁☁✘,浸泡1-2分鐘✘↟。根據需要✘☁☁☁✘,重複此過程數次✘↟。

自動洗板·▩•╃│:如果有自動洗板機✘☁☁☁✘,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品✘☁☁☁✘,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性✘↟。

2.標本採集後儘早進行提取✘☁☁☁✘,提取按相關文獻進行✘☁☁☁✘,提取後應儘快進行實驗✘↟。若不能馬上進行試驗✘☁☁☁✘,可將標本放於-20℃儲存✘☁☁☁✘,但避免反覆凍融✘↟。

操作程式

  1. 標準品的稀釋·▩•╃│:(本試劑盒提供原倍標準品一支✘☁☁☁✘,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋✘↟。)

    800 ng/L

    5號標準品

    120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

    400 ng/L

    4號標準品

    120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

    200 ng/L

    3號標準品

    120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

    100 ng/L

    2號標準品

    120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

    50 ng/L

    1號標準品

    120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數✘↟。每個標準品和空白孔建議做復孔✘↟。每個樣品根據自己的數量來定✘☁☁☁✘,能使用復孔的儘量做復孔✘↟。
  3. 加樣·▩•╃│:1)空白孔✘☁☁☁✘,空白對照孔不加樣品✘☁☁☁✘,生物素標記的抗PTCH抗體✘☁☁☁✘,鏈黴親和素-HRP✘☁☁☁✘,只加顯色劑A&B和終止液✘☁☁☁✘,其餘各步操作相同;2)標準品孔·▩•╃│:加入標準品50ul✘☁☁☁✘,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體✘☁☁☁✘,故不加);3)待測樣品孔·▩•╃│:加入樣本40ul✘☁☁☁✘,然後各加入抗PTCH抗體10ul✘╃、鏈黴親和素-HRP50ul✘☁☁☁✘,蓋上封板膜✘☁☁☁✘,輕輕震盪混勻✘☁☁☁✘,37℃溫育60分鐘✘↟。
  4. 配液·▩•╃│:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用✘↟。
  5. 洗滌·▩•╃│:小心揭掉封板膜✘☁☁☁✘,棄去液體✘☁☁☁✘,甩幹✘☁☁☁✘,每孔加滿洗滌液✘☁☁☁✘,靜置30秒後棄去✘☁☁☁✘,如此重複5次✘☁☁☁✘,拍幹✘↟。
  6. 顯色·▩•╃│:每孔先加入顯色劑A50ul✘☁☁☁✘,再加入顯色劑B50μl✘☁☁☁✘,輕輕震盪混勻✘☁☁☁✘,37℃避光顯色15分鐘. 
  7. 終止·▩•╃│:每孔加終止液50μl✘☁☁☁✘,終止反應(此時藍色立轉黃色)✘↟。
  8. 測定·▩•╃│:以空白空調零✘☁☁☁✘,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)✘↟。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行✘↟。
  9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程✘☁☁☁✘,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度✘↟。也可以使用各種應用軟體來計算✘↟。

 

操作程式總結·▩•╃│:

試劑盒效能·▩•╃│:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上✘↟。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍·▩•╃│:

檢測範圍·▩•╃│:25 ng/L -900 ng/L

   

儲存條件及有效期·▩•╃│:

儲存·▩•╃│:2-8✘↟。

有效期·▩•╃│:6個月(2-8℃)✘↟。

 
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