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大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數✘▩◕│◕:510 釋出時間✘▩◕│◕:2019/6/27
提 供 商✘▩◕│◕: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小✘▩◕│◕:
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詳細介紹✘▩◕│◕: 檔案下載    

大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)酶聯免疫

    檢測試劑盒使用說明書         AE96308Ra

   使用前仔細閱讀本說明書·│◕│✘。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理│▩₪,來檢測大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)│▩₪,只能用於研究用途│▩₪,不得用於醫學診斷·│◕│✘。

   ✘▩◕│◕:用於大鼠血清₪◕、血漿及相關液體樣本中高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)測定·│◕│✘。

工作原理:

   本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)水平·│◕│✘。向預先包被了大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)│▩₪,溫育;溫育後│▩₪,加入生物素標記的抗高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)抗體·│◕│✘。再與鏈黴親和素-HRP結合│▩₪,形成免疫複合物│▩₪,再經過溫育和洗滌│▩₪,去除未結合的酶│▩₪,然後加入底物A₪◕、B│▩₪,產生藍色│▩₪,並在酸的作用下轉化成終的黃色·│◕│✘。顏色的深淺與樣品中大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)的濃度呈正相關·│◕│✘。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品80μIU/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗U-TSH抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材

 

  1. 37恆溫箱·│◕│✘。
  2. 標準規格酶標儀·│◕│✘。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水│▩₪,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

 

注意事項

 

  1. 從2-8℃取出的試劑盒│▩₪,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘·│◕│✘。酶標包被板開封后如未用完│▩₪,板條應裝入密封袋中儲存·│◕│✘。
  2. 各步加樣均應使用加樣器│▩₪,並經常校對其準確性│▩₪,以避免試驗誤差
  3. 嚴格按照說明書的操作進行│▩₪,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  4. 免交叉汙染│▩₪,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜·│◕│✘。
  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好·│◕│✘。不同批號的試劑不要混用·│◕│✘。保質前使用·│◕│✘。
  6. 底物B對光敏感│▩₪,避免長時間暴露於光下·│◕│✘。

 

洗板方法

 

手工洗板方法✘▩◕│◕:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙│▩₪,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內│▩₪,浸泡1-2分鐘·│◕│✘。根據需要│▩₪,重複此過程數次·│◕│✘。

 

自動洗板✘▩◕│◕:如果有自動洗板機│▩₪,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品│▩₪,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性·│◕│✘。

2.標本採集後儘早進行提取│▩₪,提取按相關文獻進行│▩₪,提取後應儘快進行實驗·│◕│✘。若不能馬上進行試驗│▩₪,可將標本放於-20℃儲存│▩₪,但避免反覆凍融·│◕│✘。

 

操作程式

  1. 標準品的稀釋✘▩◕│◕:(本試劑盒提供原倍標準品一支│▩₪,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋·│◕│✘。)

    40μIU/L

    5號標準品

    120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

    20 μIU/L

    4號標準品

    120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

    10 μIU/L

    3號標準品

    120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

    5 μIU/L

    2號標準品

    120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

    2.5 μIU/L

    1號標準品

    120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  2. 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數·│◕│✘。每個標準品和空白孔建議做復孔·│◕│✘。每個樣品根據自己的數量來定│▩₪,能使用復孔的儘量做復孔·│◕│✘。
  3. 加樣✘▩◕│◕:1)空白孔│▩₪,空白對照孔不加樣品│▩₪,生物素標記的抗U-TSH抗體│▩₪,鏈黴親和素-HRP│▩₪,只加顯色劑A&B和終止液│▩₪,其餘各步操作相同;2)標準品孔✘▩◕│◕:加入標準品50ul│▩₪,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體│▩₪,故不加);3)代測樣品孔✘▩◕│◕:加入樣本40ul│▩₪,然後各加入抗U-TSH抗體10ul₪◕、鏈黴親和素-HRP50ul│▩₪,蓋上封板膜│▩₪,輕輕震盪混勻│▩₪,37℃溫育60分鐘·│◕│✘。
  4. 配液✘▩◕│◕:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用·│◕│✘。
  5. 洗滌✘▩◕│◕:小心揭掉封板膜│▩₪,棄去液體│▩₪,甩幹│▩₪,每孔加滿洗滌液│▩₪,靜置30秒後棄去│▩₪,如此重複5次│▩₪,拍幹·│◕│✘。
  6. 顯色✘▩◕│◕:每孔先加入顯色劑A50ul│▩₪,再加入顯色劑B50μl│▩₪,輕輕震盪混勻│▩₪,37℃避光顯色15分鐘. 
  7. 終止✘▩◕│◕:每孔加終止液50μl│▩₪,終止反應(此時藍色立轉黃色)·│◕│✘。
  8. 測定✘▩◕│◕:以空白空調零│▩₪,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)·│◕│✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行·│◕│✘。
  9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程│▩₪,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度·│◕│✘。也可以使用各種應用軟體來計算·│◕│✘。

 

操作程式總結✘▩◕│◕:

 

試劑盒效能✘▩◕│◕:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上·│◕│✘。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍✘▩◕│◕:

檢測範圍✘▩◕│◕:1.0 μIU/L -50μIU/L

 

儲存條件及有效期✘▩◕│◕:

儲存✘▩◕│◕:2-8·│◕│✘。

有效期✘▩◕│◕:6個月(2-8℃)·│◕│✘。

 
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