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大鼠磷酸化TAU蛋白(P-TAU)酶聯免疫分析(ELISA)

點選次數╃│✘•✘:537 釋出時間╃│✘•✘:2019/7/12
提 供 商╃│✘•✘: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小╃│✘•✘:
圖片型別╃│✘•✘: 下載次數╃│✘•✘: 112
資料型別╃│✘•✘: DOC 瀏覽次數╃│✘•✘: 537
相關產品╃│✘•✘:
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大鼠磷酸化TAU蛋白(P-TAU酶聯免疫分析(ELISA

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用      

目的╃│✘•✘:

本試劑盒用於測定大鼠腦脊液◕☁▩,血漿及相關液體樣本中磷酸化TAU蛋白(P-TAU)含量▩•│◕☁。

實驗原理╃│✘•✘:

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠磷酸化TAU蛋白(P-TAU)水平▩•│◕☁。用純化的大鼠磷酸化TAU蛋白(P-TAU)抗體包被微孔板◕☁▩,製成固相抗體◕☁▩,往包被單抗的微孔中依次加入磷酸化TAU蛋白(P-TAU)◕☁▩,再與HRP標記的磷酸化TAU蛋白(P-TAU)抗體結合◕☁▩,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物◕☁▩,經過*洗滌後加底物TMB顯色▩•│◕☁。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色◕☁▩,並在酸的作用下轉化成終的黃色▩•│◕☁。顏色的深淺和樣品中的大鼠磷酸化TAU蛋白(P-TAU)呈正相關▩•│◕☁。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)◕☁▩,透過標準曲線計算樣品中大鼠磷酸化TAU蛋白(P-TAU)濃度▩•│◕☁。

試劑盒組成╃│✘•✘:

試劑盒組成

      48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品╃│✘•✘:225ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃儲存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

樣本處理及要求╃│✘•✘:

1.血清╃│✘•✘:室溫血液自然凝固10-20分鐘◕☁▩,離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩•│◕☁。仔細收集上清◕☁▩,儲存過程中如出現沉澱◕☁▩,應再次離心▩•│◕☁。

2.血漿╃│✘•✘:應根據標本的要求選擇EDTA•◕✘✘、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑◕☁▩,混合10-20分鐘後◕☁▩,離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩•│◕☁。仔細收集上清◕☁▩,儲存過程中如有沉澱形成◕☁▩,應該再次離心▩•│◕☁。

3.尿液╃│✘•✘:用無菌管收集◕☁▩,離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩•│◕☁。仔細收集上清◕☁▩,儲存過程中如有沉澱形成◕☁▩,應再次離心▩•│◕☁。胸腹水•◕✘✘、腦脊液參照實行▩•│◕☁。

4.細胞培養上清╃│✘•✘:檢測分泌性的成份時◕☁▩,用無菌管收集▩•│◕☁。離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩•│◕☁。仔細收集上清▩•│◕☁。檢測細胞內的成份時◕☁▩,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液◕☁▩,細胞濃度達到100/ml左右▩•│◕☁。透過反覆凍融◕☁▩,以使細胞破壞並放出細胞內成份▩•│◕☁。離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩•│◕☁。仔細收集上清▩•│◕☁。儲存過程中如有沉澱形成◕☁▩,應再次離心▩•│◕☁。

5.組織標本╃│✘•✘:切割標本後◕☁▩,稱取重量▩•│◕☁。加入一定量的PBS◕☁▩,PH7.4▩•│◕☁。用液氮迅速冷凍儲存備用▩•│◕☁。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度▩•│◕☁。加入一定量的PBSPH7.4)◕☁▩,用手工或勻漿器將標本勻漿充分▩•│◕☁。離心20分鐘左右(2000-3000/分)▩•│◕☁。仔細收集上清▩•│◕☁。分裝後一份待檢測◕☁▩,其餘冷凍備用▩•│◕☁。

操作步驟

  1. 標準品的稀釋與加樣╃│✘•✘:在酶標包被板上設標準品孔10孔◕☁▩,在•◕✘✘、第二孔中分別加標準品100μl◕☁▩,然後在•◕✘✘、第二孔中加標準品稀釋液50μl◕☁▩,混勻;然後從孔•◕✘✘、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔◕☁▩,再在第三•◕✘✘、第四孔分別加標準品稀釋液50μl◕☁▩,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉◕☁▩,再各取50μl分別加到第五•◕✘✘、第六孔中◕☁▩,再在第五•◕✘✘、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul◕☁▩,混勻;混勻後從第五•◕✘✘、第六孔中各取50μl分別加到第七•◕✘✘、第八孔中◕☁▩,再在第七•◕✘✘、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl◕☁▩,混勻後從第七•◕✘✘、第八孔中分別取50μl加到第九•◕✘✘、第十孔中◕☁▩,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl◕☁▩,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉▩•│◕☁。(稀釋後各孔加樣量都為50μl◕☁▩,濃度分別為150ng/L◕☁▩,100ng/L ◕☁▩,50ng/L◕☁▩,25ng/L◕☁▩,12.5ng/L)▩•│◕☁。
  2. 加樣╃│✘•✘:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑◕☁▩,其餘各步操作相同)•◕✘✘、待測樣品孔▩•│◕☁。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl◕☁▩,然後再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)▩•│◕☁。加樣將樣品加於酶標板孔底部◕☁▩,儘量不觸及孔壁◕☁▩,輕輕晃動混勻▩•│◕☁。
  3. 溫育╃│✘•✘:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘▩•│◕☁。
  4. 配液╃│✘•✘:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋後備用▩•│◕☁。
  5. 洗滌╃│✘•✘:小心揭掉封板膜◕☁▩,棄去液體◕☁▩,甩幹◕☁▩,每孔加滿洗滌液◕☁▩,靜置30秒後棄去◕☁▩,如此重複5次◕☁▩,拍幹▩•│◕☁。
  6. 加酶╃│✘•✘:每孔加入酶標試劑50μl◕☁▩,空白孔除外▩•│◕☁。
  7. 溫育╃│✘•✘:操作同3▩•│◕☁。
  8. 洗滌╃│✘•✘:操作同5▩•│◕☁。
  9. 顯色╃│✘•✘:每孔先加入顯色劑A50μl◕☁▩,再加入顯色劑B50μl◕☁▩,輕輕震盪混勻◕☁▩,37℃避光顯色15分鐘.
  10. 終止╃│✘•✘:每孔加終止液50μl◕☁▩,終止反應(此時藍色立轉黃色)▩•│◕☁。
  11. 測定╃│✘•✘:以空白空調零◕☁▩,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)▩•│◕☁。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行▩•│◕☁。

注意事項╃│✘•✘:

  1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用◕☁▩,酶標包被板開封后如未用完◕☁▩,板條應裝入密封袋中儲存▩•│◕☁。
  2. 濃洗滌液可能會有結晶析出◕☁▩,稀釋時可在水浴中加溫助溶◕☁▩,洗滌時不影響結果▩•│◕☁。
  3. 各步加樣均應使用加樣器◕☁▩,並經常校對其準確性◕☁▩,以避免試驗誤差▩•│◕☁。一次加樣時間控制在5分鐘內◕☁▩,如標本數量多◕☁▩,推薦使用排槍加樣▩•│◕☁。
  4. 請每次測定的同時做標準曲線◕☁▩,然後做復孔▩•│◕☁。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔孔的OD值)◕☁▩,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定◕☁▩,計算時請後乘以總稀釋倍數(×n×5)▩•│◕☁。
  5. 封板膜只限一次性使用◕☁▩,以避免交叉汙染▩•│◕☁。
  6. 底物請避光儲存▩•│◕☁。
  7. 嚴格按照說明書的操作進行◕☁▩,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  8. 所有樣品◕☁▩,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理▩•│◕☁。
  9. 本試劑不同批號組分不得混用▩•│◕☁。

 10. 如與英文說明書有異◕☁▩,以英文說明書為準▩•│◕☁。

計算╃│✘•✘:

   以標準物的濃度為橫座標◕☁▩,OD值為縱座標◕☁▩,在座標紙上繪出標準曲線◕☁▩,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程式◕☁▩,將樣品的OD代入方程式◕☁▩,計算出樣品濃度◕☁▩,再乘以稀釋倍數◕☁▩,即為樣品的實際濃度▩•│◕☁。

試劑盒效能╃│✘•✘:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.95以上▩•│◕☁。

2.批內與批間應分別小於9%11%

檢測範圍╃│✘•✘: 

6ng/L -200ng/L                           

儲存條件及有效期╃│✘•✘:

1.試劑盒儲存╃│✘•✘:2-8▩•│◕☁。

2.有效期╃│✘•✘:6個月

 

 
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