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大鼠羥脯氨酸(Hyp)說明書AMEKO

點選次數▩•↟:573 釋出時間▩•↟:2019/8/2
提 供 商▩•↟: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小▩•↟:
圖片型別▩•↟: 下載次數▩•↟: 127
資料型別▩•↟: DOC 瀏覽次數▩•↟: 573
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             大鼠羥脯氨酸(Hyp)酶聯免疫

                                   檢測試劑盒使用說明書         AE90789Ra

   使用前仔細閱讀本說明書↟◕·。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理◕✘·▩₪,來檢測大鼠羥脯氨酸(Hyp)◕✘·▩₪,只能用於研究用途◕✘·▩₪,不得用於醫學診斷↟◕·。

    ▩•↟:用於大鼠血清▩•▩✘•、血漿及相關液體樣本中羥脯氨酸(Hyp)測定↟◕·。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠羥脯氨酸(Hyp)水平↟◕·。向預先包被大鼠羥脯氨酸(Hyp)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠羥脯氨酸(Hyp)◕✘·▩₪,溫育;溫育後◕✘·▩₪,加入生物素標記的抗Hyp抗體↟◕·。再與鏈黴親和素-HRP結合◕✘·▩₪,形成免疫複合物◕✘·▩₪,再經過溫育和洗滌◕✘·▩₪,去除未結合的酶◕✘·▩₪,然後加入底物A▩•▩✘•、B◕✘·▩₪,產生藍色◕✘·▩₪,並在酸的作用下轉化成終的黃色↟◕·。顏色的深淺與樣品中大鼠羥脯氨酸(Hyp)的濃度呈正相關↟◕·。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品80μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗Hyp抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

需要而未提供的試劑和器材

  • 37恆溫箱↟◕·。
  • 標準規格酶標儀↟◕·。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水◕✘·▩₪,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

注意事項

  • 從2-8℃取出的試劑盒◕✘·▩₪,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟◕·。酶標包被板開封后如未用完◕✘·▩₪,板條應裝入密封袋中儲存↟◕·。
  • 各步加樣均應使用加樣器◕✘·▩₪,並經常校對其準確性◕✘·▩₪,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行◕✘·▩₪,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染◕✘·▩₪,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟◕·。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟◕·。不同批號的試劑不要混用↟◕·。保質前使用↟◕·。
  • 底物B對光敏感◕✘·▩₪,避免長時間暴露於光下↟◕·。

洗板方法

手工洗板方法▩•↟:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙◕✘·▩₪,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內◕✘·▩₪,浸泡1-2分鐘↟◕·。根據需要◕✘·▩₪,重複此過程數次↟◕·。

自動洗板▩•↟:如果有自動洗板機◕✘·▩₪,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品◕✘·▩₪,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性↟◕·。

2.標本採集後儘早進行提取◕✘·▩₪,提取按相關文獻進行◕✘·▩₪,提取後應儘快進行實驗↟◕·。若不能馬上進行試驗◕✘·▩₪,可將標本放於-20℃儲存◕✘·▩₪,但避免反覆凍融↟◕·。

操作程式

  • 標準品的稀釋▩•↟:(本試劑盒提供原倍標準品一支◕✘·▩₪,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟◕·。)

40μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

20μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

10μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

5μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

2.5μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟◕·。每個標準品和空白孔建議做復孔↟◕·。每個樣品根據自己的數量來定◕✘·▩₪,能使用復孔的儘量做復孔↟◕·。
  • 加樣▩•↟:1)空白孔◕✘·▩₪,空白對照孔不加樣品◕✘·▩₪,生物素標記的抗Hyp抗體◕✘·▩₪,鏈黴親和素-HRP◕✘·▩₪,只加顯色劑A&B和終止液◕✘·▩₪,其餘各步操作相同;2)標準品孔▩•↟:加入標準品50ul◕✘·▩₪,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體◕✘·▩₪,故不加);3)代測樣品孔▩•↟:加入樣本40ul◕✘·▩₪,然後各加入抗Hyp抗體10ul▩•▩✘•、鏈黴親和素-HRP50ul◕✘·▩₪,蓋上封板膜◕✘·▩₪,輕輕震盪混勻◕✘·▩₪,37℃溫育60分鐘↟◕·。
  • 配液▩•↟:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟◕·。
  • 洗滌▩•↟:小心揭掉封板膜◕✘·▩₪,棄去液體◕✘·▩₪,甩幹◕✘·▩₪,每孔加滿洗滌液◕✘·▩₪,靜置30秒後棄去◕✘·▩₪,如此重複5次◕✘·▩₪,拍幹↟◕·。
  • 顯色▩•↟:每孔先加入顯色劑A50ul◕✘·▩₪,再加入顯色劑B50μl◕✘·▩₪,輕輕震盪混勻◕✘·▩₪,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止▩•↟:每孔加終止液50μl◕✘·▩₪,終止反應(此時藍色立轉黃色)↟◕·。
  • 測定▩•↟:以空白空調零◕✘·▩₪,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)↟◕·。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟◕·。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程◕✘·▩₪,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟◕·。也可以使用各種應用軟體來計算↟◕·。

操作程式總結▩•↟:

試劑盒效能▩•↟:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上↟◕·。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍▩•↟:

檢測範圍▩•↟:0-40μg/L↟◕·。

 

儲存條件及有效期▩•↟:

儲存▩•↟:2-8↟◕·。

有效期▩•↟:6個月(2-8℃)↟◕·。

 

 
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