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大鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)試劑盒說明書

點選次數╃·₪:477 釋出時間╃·₪:2019/8/9
提 供 商╃·₪: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小╃·₪:
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大鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)酶聯免疫

      檢測試劑盒使用說明書         AE96335Hu

使用前仔細閱讀本說明書↟│₪│◕。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理✘↟·↟☁,來檢測大鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)✘↟·↟☁,只能用於研究用途✘↟·↟☁,不得用於醫學診斷↟│₪│◕。

    ╃·₪:用於大鼠血清☁╃•▩↟、血漿及相關液體樣本中神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)測定↟│₪│◕。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)水平↟│₪│◕。向預先包被了大鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)✘↟·↟☁,溫育;溫育後✘↟·↟☁,加入生物素標記的抗神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)抗體↟│₪│◕。再與鏈黴親和素-HRP結合✘↟·↟☁,形成免疫複合物✘↟·↟☁,再經過溫育和洗滌✘↟·↟☁,去除未結合的酶✘↟·↟☁,然後加入底物A☁╃•▩↟、B✘↟·↟☁,產生藍色✘↟·↟☁,並在酸的作用下轉化成終的黃色↟│₪│◕。顏色的深淺與樣品中大鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)的濃度呈正相關↟│₪│◕。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品1600ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗GFAP抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

需要而未提供的試劑和器材

  • 37恆溫箱↟│₪│◕。
  • 標準規格酶標儀↟│₪│◕。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水✘↟·↟☁,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

注意事項

  • 從2-8℃取出的試劑盒✘↟·↟☁,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟│₪│◕。酶標包被板開封后如未用完✘↟·↟☁,板條應裝入密封袋中儲存↟│₪│◕。
  • 各步加樣均應使用加樣器✘↟·↟☁,並經常校對其準確性✘↟·↟☁,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行✘↟·↟☁,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染✘↟·↟☁,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟│₪│◕。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟│₪│◕。不同批號的試劑不要混用↟│₪│◕。保質前使用↟│₪│◕。
  • 底物B對光敏感✘↟·↟☁,避免長時間暴露於光下↟│₪│◕。

洗板方法

手工洗板方法╃·₪:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙✘↟·↟☁,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內✘↟·↟☁,浸泡1-2分鐘↟│₪│◕。根據需要✘↟·↟☁,重複此過程數次↟│₪│◕。

 

自動洗板╃·₪:如果有自動洗板機✘↟·↟☁,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品✘↟·↟☁,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性↟│₪│◕。

2.標本採集後儘早進行提取✘↟·↟☁,提取按相關文獻進行✘↟·↟☁,提取後應儘快進行實驗↟│₪│◕。若不能馬上進行試驗✘↟·↟☁,可將標本放於-20℃儲存✘↟·↟☁,但避免反覆凍融↟│₪│◕。

操作程式

  • 標準品的稀釋╃·₪:(本試劑盒提供原倍標準品一支✘↟·↟☁,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟│₪│◕。)

800ng/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

400ng/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

200ng/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

100ng/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

50ng/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟│₪│◕。每個標準品和空白孔建議做復孔↟│₪│◕。每個樣品根據自己的數量來定✘↟·↟☁,能使用復孔的儘量做復孔↟│₪│◕。
  • 加樣╃·₪:1)空白孔✘↟·↟☁,空白對照孔不加樣品✘↟·↟☁,生物素標記的抗GFAP抗體✘↟·↟☁,鏈黴親和素-HRP✘↟·↟☁,只加顯色劑A&B和終止液✘↟·↟☁,其餘各步操作相同;2)標準品孔╃·₪:加入標準品50ul✘↟·↟☁,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體✘↟·↟☁,故不加);3)代測樣品孔╃·₪:加入樣本40ul✘↟·↟☁,然後各加入抗GFAP抗體10ul☁╃•▩↟、鏈黴親和素-HRP50ul✘↟·↟☁,蓋上封板膜✘↟·↟☁,輕輕震盪混勻✘↟·↟☁,37℃溫育60分鐘↟│₪│◕。
  • 配液╃·₪:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟│₪│◕。
  • 洗滌╃·₪:小心揭掉封板膜✘↟·↟☁,棄去液體✘↟·↟☁,甩幹✘↟·↟☁,每孔加滿洗滌液✘↟·↟☁,靜置30秒後棄去✘↟·↟☁,如此重複5次✘↟·↟☁,拍幹↟│₪│◕。
  • 顯色╃·₪:每孔先加入顯色劑A50ul✘↟·↟☁,再加入顯色劑B50μl✘↟·↟☁,輕輕震盪混勻✘↟·↟☁,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止╃·₪:每孔加終止液50μl✘↟·↟☁,終止反應(此時藍色立轉黃色)↟│₪│◕。
  • 測定╃·₪:以空白空調零✘↟·↟☁,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)↟│₪│◕。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟│₪│◕。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程✘↟·↟☁,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟│₪│◕。也可以使用各種應用軟體來計算↟│₪│◕。

操作程式總結╃·₪:

試劑盒效能╃·₪:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上↟│₪│◕。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍╃·₪:

檢測範圍╃·₪:25ng/L - 800ng/L

儲存條件及有效期╃·₪:

 

儲存╃·₪:2-8↟│₪│◕。

有效期╃·₪:6個月(2-8℃)↟│₪│◕。

 
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