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大鼠血管內皮細胞蛋白C受體試劑盒說明書

點選次數•▩:541 釋出時間•▩:2019/9/12
提 供 商•▩: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小•▩:
圖片型別•▩: 下載次數•▩: 117
資料型別•▩: DOC 瀏覽次數•▩: 541
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大鼠血管內皮細胞蛋白C受體EPCR酶聯免疫

     檢測試劑盒使用說明書         AE94378Ra

使用前仔細閱讀本說明書☁╃╃。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理│₪,來檢測大鼠血管內皮細胞蛋白C受體(EPCR)│₪,只能用於研究用途│₪,不得用於醫學診斷☁╃╃。

    •▩:用於大鼠血清╃▩₪╃、血漿及相關液體樣本中血管內皮細胞蛋白C受體EPCR)測定☁╃╃。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠血管內皮細胞蛋白C受體(EPCR)水平☁╃╃。向預先包被大鼠血管內皮細胞蛋白C受體(EPCR)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠血管內皮細胞蛋白C受體(EPCR)│₪,溫育;溫育後│₪,加入生物素標記的抗血管內皮細胞蛋白C受體EPCR抗體☁╃╃。再與鏈黴親和素-HRP結合│₪,形成免疫複合物│₪,再經過溫育和洗滌│₪,去除未結合的酶│₪,然後加入底物A╃▩₪╃、B│₪,產生藍色│₪,並在酸的作用下轉化成終的黃色☁╃╃。顏色的深淺與樣品中大鼠血管內皮細胞蛋白C受體(EPCR)的濃度呈正相關☁╃╃。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品40μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗EPCR抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材

  • 37恆溫箱☁╃╃。
  • 標準規格酶標儀☁╃╃。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水│₪,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項

  • 從2-8℃取出的試劑盒│₪,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘☁╃╃。酶標包被板開封后如未用完│₪,板條應裝入密封袋中儲存☁╃╃。
  • 各步加樣均應使用加樣器│₪,並經常校對其準確性│₪,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行│₪,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染│₪,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜☁╃╃。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好☁╃╃。不同批號的試劑不要混用☁╃╃。保質前使用☁╃╃。
  • 底物B對光敏感│₪,避免長時間暴露於光下☁╃╃。

 

洗板方法

 

手工洗板方法•▩:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙│₪,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內│₪,浸泡1-2分鐘☁╃╃。根據需要│₪,重複此過程數次☁╃╃。

 

自動洗板•▩:如果有自動洗板機│₪,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品│₪,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性☁╃╃。

2.標本採集後儘早進行提取│₪,提取按相關文獻進行│₪,提取後應儘快進行實驗☁╃╃。若不能馬上進行試驗│₪,可將標本放於-20℃儲存│₪,但避免反覆凍融☁╃╃。

操作程式

  • 標準品的稀釋•▩:(本試劑盒提供原倍標準品一支│₪,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋☁╃╃。)

20μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

10μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

5μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

2.5μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

1.25μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數☁╃╃。每個標準品和空白孔建議做復孔☁╃╃。每個樣品根據自己的數量來定│₪,能使用復孔的儘量做復孔☁╃╃。
  • 加樣•▩:1)空白孔│₪,空白對照孔不加樣品│₪,生物素標記的抗EPCR抗體│₪,鏈黴親和素-HRP│₪,只加顯色劑A&B和終止液│₪,其餘各步操作相同;2)標準品孔•▩:加入標準品50ul│₪,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體│₪,故不加);3)待測樣品孔•▩:加入樣本40ul│₪,然後各加入抗EPCR抗體10ul╃▩₪╃、鏈黴親和素-HRP50ul│₪,蓋上封板膜│₪,輕輕震盪混勻│₪,37℃溫育60分鐘☁╃╃。
  • 配液•▩:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用☁╃╃。
  • 洗滌•▩:小心揭掉封板膜│₪,棄去液體│₪,甩幹│₪,每孔加滿洗滌液│₪,靜置30秒後棄去│₪,如此重複5次│₪,拍幹☁╃╃。
  • 顯色•▩:每孔先加入顯色劑A50ul│₪,再加入顯色劑B50μl│₪,輕輕震盪混勻│₪,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止•▩:每孔加終止液50μl│₪,終止反應(此時藍色立轉黃色)☁╃╃。
  • 測定•▩:以空白空調零│₪,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)☁╃╃。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行☁╃╃。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程│₪,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度☁╃╃。也可以使用各種應用軟體來計算☁╃╃。

操作程式總結•▩:

試劑盒效能•▩:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上☁╃╃。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍•▩:

檢測範圍•▩:0.6μg/L -22μg/L

 

儲存條件及有效期•▩:

 

儲存•▩:2-8☁╃╃。

有效期•▩:6個月(2-8℃)☁╃╃。

 
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