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大鼠組織型纖溶酶原啟用劑(t-PA)酶聯免疫 試劑盒使用說明書

點選次數₪✘:583 釋出時間₪✘:2019/9/20
提 供 商₪✘: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小₪✘:
圖片型別₪✘: 下載次數₪✘: 145
資料型別₪✘: DOC 瀏覽次數₪✘: 583
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大鼠組織型纖溶酶原啟用劑(t-PA)酶聯免疫

    檢測試劑盒使用說明書        AE91670Ra

使用前仔細閱讀本說明書▩••◕▩。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理↟↟,來檢測大鼠組織型纖溶酶原啟用劑(t-PA)↟↟,只能用於研究用途↟↟,不得用於醫學診斷▩••◕▩。

    ₪✘:用於大鼠血清▩╃、血漿及相關液體樣本中組織型纖溶酶原啟用劑(t-PA)測定▩••◕▩。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠組織型纖溶酶原啟用劑(t-PA)水平▩••◕▩。向預先包被了大鼠組織型纖溶酶原啟用劑(t-PA)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠組織型纖溶酶原啟用劑(t-PA)↟↟,溫育;溫育後↟↟,加入生物素標記的抗t-PA抗體▩••◕▩。再與鏈黴親和素-HRP結合↟↟,形成免疫複合物↟↟,再經過溫育和洗滌↟↟,去除未結合的酶↟↟,然後加入底物A▩╃、B↟↟,產生藍色↟↟,並在酸的作用下轉化成終的黃色▩••◕▩。顏色的深淺與樣品中大鼠組織型纖溶酶原啟用劑(t-PA)的濃度呈正相關▩••◕▩。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品32ug/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗t-PA抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

需要而未提供的試劑和器材

  • 37恆溫箱▩••◕▩。
  • 標準規格酶標儀▩••◕▩。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水↟↟,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

注意事項

  • 從2-8℃取出的試劑盒↟↟,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘▩••◕▩。酶標包被板開封后如未用完↟↟,板條應裝入密封袋中儲存▩••◕▩。
  • 各步加樣均應使用加樣器↟↟,並經常校對其準確性↟↟,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行↟↟,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染↟↟,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜▩••◕▩。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好▩••◕▩。不同批號的試劑不要混用▩••◕▩。保質前使用▩••◕▩。
  • 底物B對光敏感↟↟,避免長時間暴露於光下▩••◕▩。

洗板方法

手工洗板方法₪✘:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙↟↟,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內↟↟,浸泡1-2分鐘▩••◕▩。根據需要↟↟,重複此過程數次▩••◕▩。

 

自動洗板₪✘:如果有自動洗板機↟↟,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品↟↟,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性▩••◕▩。

2.標本採集後儘早進行提取↟↟,提取按相關文獻進行↟↟,提取後應儘快進行實驗▩••◕▩。若不能馬上進行試驗↟↟,可將標本放於-20℃儲存↟↟,但避免反覆凍融▩••◕▩。

操作程式

  • 標準品的稀釋₪✘:(本試劑盒提供原倍標準品一支↟↟,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋▩••◕▩。)

16ug/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

8ug/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

4ug/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

2ug/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

1ug/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  • 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數▩••◕▩。每個標準品和空白孔建議做復孔▩••◕▩。每個樣品根據自己的數量來定↟↟,能使用復孔的儘量做復孔▩••◕▩。
  • 加樣₪✘:1)空白孔↟↟,空白對照孔不加樣品↟↟,生物素標記的抗t-PA抗體↟↟,鏈黴親和素-HRP↟↟,只加顯色劑A&B和終止液↟↟,其餘各步操作相同;2)標準品孔₪✘:加入標準品50ul↟↟,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體↟↟,故不加);3)待測樣品孔₪✘:加入樣本40ul↟↟,然後各加入抗t-PA抗體10ul▩╃、鏈黴親和素-HRP50ul↟↟,蓋上封板膜↟↟,輕輕震盪混勻↟↟,37℃溫育60分鐘▩••◕▩。
  • 配液₪✘:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用▩••◕▩。
  • 洗滌₪✘:小心揭掉封板膜↟↟,棄去液體↟↟,甩幹↟↟,每孔加滿洗滌液↟↟,靜置30秒後棄去↟↟,如此重複5次↟↟,拍幹▩••◕▩。
  • 顯色₪✘:每孔先加入顯色劑A50ul↟↟,再加入顯色劑B50μl↟↟,輕輕震盪混勻↟↟,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止₪✘:每孔加終止液50μl↟↟,終止反應(此時藍色立轉黃色)▩••◕▩。
  • 測定₪✘:以空白空調零↟↟,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)▩••◕▩。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行▩••◕▩。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程↟↟,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度▩••◕▩。也可以使用各種應用軟體來計算▩••◕▩。

操作程式總結₪✘:

試劑盒效能₪✘:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上▩••◕▩。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍₪✘:

檢測範圍₪✘:0.5μg/L -17μg/L

 

儲存條件及有效期₪✘:

儲存₪✘:2-8▩••◕▩。

有效期₪✘:6個月(2-8℃)▩••◕▩。

 
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