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大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數▩╃↟:499 釋出時間▩╃↟:2020/4/10
提 供 商▩╃↟: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小▩╃↟:
圖片型別▩╃↟: 下載次數▩╃↟: 117
資料型別▩╃↟: DOC 瀏覽次數▩╃↟: 499
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詳細介紹▩╃↟: 檔案下載    

使用前仔細閱讀本說明書╃↟·•◕。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理·╃,來檢測大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)·╃,只能用於研究用途·╃,不得用於醫學診斷╃↟·•◕。

    ▩╃↟:用於大鼠血清☁╃、血漿及相關液體樣本中葡萄糖調節蛋白78(GRP78)測定╃↟·•◕。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)水平╃↟·•◕。向預先包被大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)·╃,溫育;溫育後·╃,加入生物素標記的抗GRP78抗體╃↟·•◕。再與鏈黴親和素-HRP結合·╃,形成免疫複合物·╃,再經過溫育和洗滌·╃,去除未結合的酶·╃,然後加入底物A☁╃、B·╃,產生藍色·╃,並在酸的作用下轉化成終的黃色╃↟·•◕。顏色的深淺與樣品中大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)的濃度呈正相關╃↟·•◕。

 

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品160 pg/mL

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗GRP78抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

需要而未提供的試劑和器材

  • 37恆溫箱╃↟·•◕。
  • 標準規格酶標儀╃↟·•◕。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水·╃,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項

  • 從2-8℃取出的試劑盒·╃,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘╃↟·•◕。酶標包被板開封后如未用完·╃,板條應裝入密封袋中儲存╃↟·•◕。
  • 各步加樣均應使用加樣器·╃,並經常校對其準確性·╃,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行·╃,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染·╃,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜╃↟·•◕。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好╃↟·•◕。不同批號的試劑不要混用╃↟·•◕。保質前使用╃↟·•◕。
  • 底物B對光敏感·╃,避免長時間暴露於光下╃↟·•◕。

 

洗板方法

手工洗板方法▩╃↟:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙·╃,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內·╃,浸泡1-2分鐘╃↟·•◕。根據需要·╃,重複此過程數次╃↟·•◕。

 

自動洗板▩╃↟:如果有自動洗板機·╃,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品·╃,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性╃↟·•◕。

2.標本採集後儘早進行提取·╃,提取按相關文獻進行·╃,提取後應儘快進行實驗╃↟·•◕。若不能馬上進行試驗·╃,可將標本放於-20℃儲存·╃,但避免反覆凍融╃↟·•◕。

操作程式

  • 標準品的稀釋▩╃↟:(本試劑盒提供原倍標準品一支·╃,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋╃↟·•◕。)

80pg/mL

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

40pg/mL

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

20pg/mL

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

10pg/mL

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

5pg/mL

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數╃↟·•◕。每個標準品和空白孔建議做復孔╃↟·•◕。每個樣品根據自己的數量來定·╃,能使用復孔的儘量做復孔╃↟·•◕。
  • 加樣▩╃↟:1)空白孔·╃,空白對照孔不加樣品·╃,生物素標記的抗GRP78抗體·╃,鏈黴親和素-HRP·╃,只加顯色劑A&B和終止液·╃,其餘各步操作相同;2)標準品孔▩╃↟:加入標準品50ul·╃,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體·╃,故不加);3)代測樣品孔▩╃↟:加入樣本40ul·╃,然後各加入抗GRP78抗體10ul☁╃、鏈黴親和素-HRP50ul·╃,蓋上封板膜·╃,輕輕震盪混勻·╃,37℃溫育60分鐘╃↟·•◕。
  • 配液▩╃↟:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用╃↟·•◕。
  • 洗滌▩╃↟:小心揭掉封板膜·╃,棄去液體·╃,甩幹·╃,每孔加滿洗滌液·╃,靜置30秒後棄去·╃,如此重複5次·╃,拍幹╃↟·•◕。
  • 顯色▩╃↟:每孔先加入顯色劑A50ul·╃,再加入顯色劑B50μl·╃,輕輕震盪混勻·╃,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止▩╃↟:每孔加終止液50μl·╃,終止反應(此時藍色立轉黃色)╃↟·•◕。
  • 測定▩╃↟:以空白空調零·╃,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)╃↟·•◕。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行╃↟·•◕。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程·╃,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度╃↟·•◕。也可以使用各種應用軟體來計算╃↟·•◕。

 

操作程式總結▩╃↟:

 

試劑盒效能▩╃↟:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上╃↟·•◕。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍▩╃↟:

檢測範圍▩╃↟:3pg/mL90pg/mL╃↟·•◕。

 

儲存條件及有效期▩╃↟:

儲存▩╃↟:2-8╃↟·•◕。

有效期▩╃↟:6個月(2-8℃)╃↟·•◕。

 
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