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大鼠免疫球蛋白G(IgG)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數╃│▩•▩:506 釋出時間╃│▩•▩:2020/4/10
提 供 商╃│▩•▩: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小╃│▩•▩:
圖片型別╃│▩•▩: 下載次數╃│▩•▩: 118
資料型別╃│▩•▩: DOC 瀏覽次數╃│▩•▩: 506
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詳細介紹╃│▩•▩: 檔案下載    

使用前仔細閱讀本說明書₪│。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理╃☁,來檢測大鼠免疫球蛋白G(IgG)╃☁,只能用於研究用途╃☁,不得用於醫學診斷₪│。

    ╃│▩•▩:用於大鼠血清₪│·、血漿及相關液體樣本中免疫球蛋白G(IgG)測定₪│。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠免疫球蛋白G(IgG)水平₪│。向預先包被了免疫球蛋白G(IgG)克隆抗體的酶標孔中加入免疫球蛋白G(IgG)╃☁,溫育;溫育後╃☁,加入生物素標記的抗IGG抗體₪│。再與鏈黴親和素-HRP結合╃☁,形成免疫複合物╃☁,再經過溫育和洗滌╃☁,去除未結合的酶╃☁,然後加入底物A₪│·、B╃☁,產生藍色╃☁,並在酸的作用下轉化成終的黃色₪│。顏色的深淺與樣品中免疫球蛋白G(IgG)的濃度呈正相關₪│。

 

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品╃│▩•▩:24μg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗IGG抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材

  • 37恆溫箱₪│。
  • 標準規格酶標儀₪│。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水╃☁,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項

  • 從2-8℃取出的試劑盒╃☁,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘₪│。酶標包被板開封后如未用完╃☁,板條應裝入密封袋中儲存₪│。
  • 各步加樣均應使用加樣器╃☁,並經常校對其準確性╃☁,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行╃☁,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染╃☁,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜₪│。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好₪│。不同批號的試劑不要混用₪│。保質前使用₪│。
  • 底物B對光敏感╃☁,避免長時間暴露於光下₪│。

 

洗板方法

手工洗板方法╃│▩•▩:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙╃☁,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內╃☁,浸泡1-2分鐘₪│。根據需要╃☁,重複此過程數次₪│。

 

自動洗板╃│▩•▩:如果有自動洗板機╃☁,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品╃☁,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性₪│。

2.標本採集後儘早進行提取╃☁,提取按相關文獻進行╃☁,提取後應儘快進行實驗₪│。若不能馬上進行試驗╃☁,可將標本放於-20℃儲存╃☁,但避免反覆凍融₪│。

 

操作程式

  • 標準品的稀釋╃│▩•▩:(本試劑盒提供原倍標準品一支╃☁,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋₪│。)

12μg/ml

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

6μg/ml

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

3μg/ml

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

1.5μg/ml

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

0.75μg/ml

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數₪│。每個標準品和空白孔建議做復孔₪│。每個樣品根據自己的數量來定╃☁,能使用復孔的儘量做復孔₪│。
  • 加樣╃│▩•▩:1)空白孔╃☁,空白對照孔不加樣品╃☁,生物素標記的抗IGG抗體╃☁,鏈黴親和素-HRP╃☁,只加顯色劑A&B和終止液╃☁,其餘各步操作相同;2)標準品孔╃│▩•▩:加入標準品50ul╃☁,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體╃☁,故不加);3)代測樣品孔╃│▩•▩:加入樣本40ul╃☁,然後各加入抗IGG抗體10ul₪│·、鏈黴親和素-HRP50ul╃☁,蓋上封板膜╃☁,輕輕震盪混勻╃☁,37℃溫育60分鐘₪│。
  • 配液╃│▩•▩:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用₪│。
  • 洗滌╃│▩•▩:小心揭掉封板膜╃☁,棄去液體╃☁,甩幹╃☁,每孔加滿洗滌液╃☁,靜置30秒後棄去╃☁,如此重複5次╃☁,拍幹₪│。
  • 顯色╃│▩•▩:每孔先加入顯色劑A50ul╃☁,再加入顯色劑B50μl╃☁,輕輕震盪混勻╃☁,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止╃│▩•▩:每孔加終止液50μl╃☁,終止反應(此時藍色立轉黃色)₪│。
  • 測定╃│▩•▩:以空白空調零╃☁,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)₪│。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行₪│。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程╃☁,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度₪│。也可以使用各種應用軟體來計算₪│。

 

操作程式總結╃│▩•▩:

檢測範圍╃│▩•▩:0.4μg/ml -15μg/ml

儲存╃│▩•▩:2-8₪│。

有效期╃│▩•▩:6個月(2-8℃)₪│。

 
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