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小鼠層粘蛋白(LN)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數☁☁│:471 釋出時間☁☁│:2020/4/16
提 供 商☁☁│: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小☁☁│:
圖片型別☁☁│: 下載次數☁☁│: 164
資料型別☁☁│: DOC 瀏覽次數☁☁│: 471
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詳細介紹☁☁│: 檔案下載    

使用前仔細閱讀本說明書↟☁▩。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理│▩,來檢測小鼠層粘蛋白(LN)│▩,只能用於研究用途│▩,不得用於醫學診斷↟☁▩。

    ☁☁│:用於小鼠血清│╃╃·、血漿及相關液體樣本中層粘蛋白(LN)測定↟☁▩。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中小鼠層粘蛋白(LN)水平↟☁▩。向預先包被了小鼠層粘蛋白(LN)單克隆抗體的酶標孔中加入小鼠層粘蛋白(LN)│▩,溫育;溫育後│▩,加入生物素標記的抗層粘蛋白(LN)抗體↟☁▩。再與鏈黴親和素-HRP結合│▩,形成免疫複合物│▩,再經過溫育和洗滌│▩,去除未結合的酶│▩,然後加入底物A│╃╃·、B│▩,產生藍色│▩,並在酸的作用下轉化成終的黃色↟☁▩。顏色的深淺與樣品中小鼠層粘蛋白(LN)的濃度呈正相關↟☁▩。

 

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品1200 μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗LN抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材

  • 37恆溫箱↟☁▩。
  • 標準規格酶標儀↟☁▩。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水│▩,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項

  • 從2-8℃取出的試劑盒│▩,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟☁▩。酶標包被板開封后如未用完│▩,板條應裝入密封袋中儲存↟☁▩。
  • 各步加樣均應使用加樣器│▩,並經常校對其準確性│▩,以避免試驗誤差↟☁▩。
  • 嚴格按照說明書的操作進行│▩,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準↟☁▩。
  • 免交叉汙染│▩,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟☁▩。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟☁▩。不同批號的試劑不要混用↟☁▩。保質前使用↟☁▩。
  • 底物B對光敏感│▩,避免長時間暴露於光下↟☁▩。

 

洗板方法

1.手工洗板方法☁☁│:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙│▩,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內│▩,浸泡1-2分鐘↟☁▩。根據需要│▩,重複此過程數次↟☁▩。

2.自動洗板☁☁│:如果有自動洗板機│▩,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品│▩,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性↟☁▩。

2.標本採集後儘早進行提取│▩,提取按相關文獻進行│▩,提取後應儘快進行實驗↟☁▩。若不能馬上進行試驗│▩,可將標本放於-20℃儲存│▩,但避免反覆凍融↟☁▩。

 

操作程式

  • 標準品的稀釋☁☁│:(本試劑盒提供原倍標準品一支│▩,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟☁▩。)

600 μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

300 μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

150 μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

75 μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

37.5 μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  • 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟☁▩。每個標準品和空白孔建議做復孔↟☁▩。每個樣品根據自己的數量來定│▩,能使用復孔的儘量做復孔↟☁▩。
  • 加樣☁☁│:1)空 白孔│▩,空白對照孔不加樣品│▩,生物素標記的抗LN抗體│▩,鏈黴親和素-HRP│▩,只加顯色劑A&B和終止液│▩,其餘各步操作相同;2)標準品孔☁☁│:加入標準品50ul│▩,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體│▩,故不加);3)待測樣品孔☁☁│:加入樣本40ul│▩,然後各加入抗LN抗體10ul│╃╃·、鏈黴親和素-HRP50ul│▩,蓋上封板膜│▩,輕輕震盪混勻│▩,37℃溫育60分鐘↟☁▩。 
  • 配液☁☁│:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟☁▩。
  • 洗滌☁☁│:小心揭掉封板膜│▩,棄去液體│▩,甩幹│▩,每孔加滿洗滌液│▩,靜置30秒後棄去│▩,如此重複5次│▩,拍幹↟☁▩。
  • 顯色☁☁│:每孔先加入顯色劑A50ul│▩,再加入顯色劑B50μl│▩,輕輕震盪混勻│▩,37℃避光顯色15分鐘↟☁▩。
  • 終止☁☁│:每孔加終止液50μl│▩,終止反應(此時藍色立轉黃色)↟☁▩。
  • 測定☁☁│:以空白空調零│▩,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)↟☁▩。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟☁▩。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程│▩,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟☁▩。也可以使用各種應用軟體來計算↟☁▩。

 

操作程式總結☁☁│:

試劑盒效能☁☁│:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上↟☁▩。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍☁☁│:

檢測範圍☁☁│:20μg/L -600μg/L

 

儲存條件及有效期☁☁│:

儲存☁☁│:2-8

有效期☁☁│:6個月(2-8℃)

 
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