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牛α1-微球蛋白(α1-MG)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數↟╃✘│:483 釋出時間↟╃✘│:2020/4/21
提 供 商↟╃✘│: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小↟╃✘│:
圖片型別↟╃✘│: 下載次數↟╃✘│: 126
資料型別↟╃✘│: DOC 瀏覽次數↟╃✘│: 483
相關產品↟╃✘│:
詳細介紹↟╃✘│: 檔案下載    

使用前仔細閱讀本說明書☁◕◕▩。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理╃•╃◕,來檢測牛α1-微球蛋白(α1-MG)╃•╃◕,只能用於研究用途╃•╃◕,不得用於醫學診斷☁◕◕▩。

    ↟╃✘│:用於牛血清◕╃•、血漿及相關液體樣本中α1-微球蛋白(α1-MG)測定☁◕◕▩。

工作原理↟╃✘│:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中牛α1-微球蛋白(α1-MG)水平☁◕◕▩。向預先包被了牛α1-微球蛋白(α1-MG)單克隆抗體的酶標孔中加入牛α1-微球蛋白(α1-MG)╃•╃◕,溫育;溫育後╃•╃◕,加入生物素標記的抗α1-微球蛋白(α1-MG)抗體☁◕◕▩。再與鏈黴親和素-HRP結合╃•╃◕,形成免疫複合物╃•╃◕,再經過溫育和洗滌╃•╃◕,去除未結合的酶╃•╃◕,然後加入底物A◕╃•、B╃•╃◕,產生藍色╃•╃◕,並在酸的作用下轉化成終的黃色☁◕◕▩。顏色的深淺與樣品中牛α1-微球蛋白(α1-MG)的濃度呈正相關☁◕◕▩。

試劑盒組成 ↟╃✘│:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品9600ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗α1-MG抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

需要而未提供的試劑和器材↟╃✘│:

  • 37恆溫箱
  • 標準規格酶標儀
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項↟╃✘│:

  • 從2-8℃取出的試劑盒╃•╃◕,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘☁◕◕▩。酶標包被板開封后如未用完╃•╃◕,板條應裝入密封袋中儲存☁◕◕▩。
  • 各步加樣均應使用加樣器╃•╃◕,並經常校對其準確性╃•╃◕,以避免試驗誤差☁◕◕▩。
  • 嚴格按照說明書的操作進行╃•╃◕,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準☁◕◕▩。
  • 免交叉汙染╃•╃◕,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜☁◕◕▩。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好☁◕◕▩。不同批號的試劑不要混用☁◕◕▩。保質前使用☁◕◕▩。
  • 底物B對光敏感╃•╃◕,避免長時間暴露於光下☁◕◕▩。

 

洗板方法↟╃✘│:

1.手工洗板方法↟╃✘│:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙╃•╃◕,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內╃•╃◕,浸泡1-2分鐘☁◕◕▩。根據需要╃•╃◕,重複此過程數次☁◕◕▩。

2.自動洗板↟╃✘│:如果有自動洗板機╃•╃◕,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中☁◕◕▩。

 

標本要求 ↟╃✘│:

1.不能檢測含NaN3的樣品╃•╃◕,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性☁◕◕▩。

2.標本採集後儘早進行提取╃•╃◕,提取按相關文獻進行╃•╃◕,提取後應儘快進行實驗☁◕◕▩。若不能馬上進行試驗╃•╃◕,可將標本放於-20℃儲存╃•╃◕,但避免反覆凍融☁◕◕▩。

 

操作程式↟╃✘│:

  • 標準品的稀釋↟╃✘│:(本試劑盒提供原倍標準品一支╃•╃◕,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋☁◕◕▩。)

4800ng/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

2400ng/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

1200ng/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

600ng/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

300ng/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數☁◕◕▩。每個標準品和空白孔建議做復孔☁◕◕▩。每個樣品根據自己的數量來定╃•╃◕,能使用復孔的儘量做復孔☁◕◕▩。
  • 加樣↟╃✘│:1)空白孔╃•╃◕,空白對照孔不加樣品╃•╃◕,生物素標記的抗α1-MG抗體╃•╃◕,鏈黴親和素-HRP╃•╃◕,只加顯色劑A&B和終止液╃•╃◕,其餘各步操作相同;2)標準品孔↟╃✘│:加入標準品50ul╃•╃◕,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體╃•╃◕,故不加);3)代測樣品孔↟╃✘│:加入樣本40ul╃•╃◕,然後各加入抗α1-MG抗體10ul◕╃•、鏈黴親和素-HRP50ul╃•╃◕,蓋上封板膜╃•╃◕,輕輕震盪混勻╃•╃◕,37℃溫育60分鐘☁◕◕▩。
  • 配液↟╃✘│:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用☁◕◕▩。
  • 洗滌↟╃✘│:小心揭掉封板膜╃•╃◕,棄去液體╃•╃◕,甩幹╃•╃◕,每孔加滿洗滌液╃•╃◕,靜置30秒後棄去╃•╃◕,如此重複5次╃•╃◕,拍幹☁◕◕▩。
  • 顯色↟╃✘│:每孔先加入顯色劑A50ul╃•╃◕,再加入顯色劑B50μl╃•╃◕,輕輕震盪混勻╃•╃◕,37℃避光顯色15分鐘☁◕◕▩。
  • 終止↟╃✘│:每孔加終止液50μl╃•╃◕,終止反應(此時藍色立轉黃色)☁◕◕▩。
  • 測定↟╃✘│:以空白空調零╃•╃◕,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)☁◕◕▩。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行☁◕◕▩。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程╃•╃◕,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度☁◕◕▩。也可以使用各種應用軟體來計算☁◕◕▩。

 

操作程式總結↟╃✘│:

試劑盒效能↟╃✘│:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上☁◕◕▩。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍↟╃✘│:

檢測範圍↟╃✘│:150ng/L - 4800ng/L

 

儲存條件及有效期↟╃✘│:

儲存↟╃✘│:2-8☁◕◕▩。

有效期↟╃✘│:6個月(2-8℃)☁◕◕▩。

 
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