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大鼠核因子κB受體活化因子配基酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數▩•·▩:464 釋出時間▩•·▩:2020/4/29
提 供 商▩•·▩: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小▩•·▩:
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資料型別▩•·▩: DOC 瀏覽次數▩•·▩: 464
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使用前仔細閱讀本說明書◕·。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理│↟,來檢測大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)│↟,只能用於研究用途│↟,不得用於醫學診斷◕·。

    ▩•·▩:用於大鼠血清✘₪✘✘、血漿及相關液體樣本中核因子κB受體活化因子配基(RANKL)測定◕·。

 

工作原理▩•·▩:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)水平◕·。向預先包被了大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)│↟,溫育;溫育後│↟,加入生物素標記的抗核因子κB受體活化因子配基(RANKL)抗體◕·。再與鏈黴親和素-HRP結合│↟,形成免疫複合物│↟,再經過溫育和洗滌│↟,去除未結合的酶│↟,然後加入底物A✘₪✘✘、B│↟,產生藍色│↟,並在酸的作用下轉化成終的黃色◕·。顏色的深淺與樣品中大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)的濃度呈正相關◕·。

 

試劑盒組成 ▩•·▩:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品960 pmol/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗RANKL抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材:

  • 37恆溫箱
  • 標準規格酶標儀
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項:

  • 從2-8℃取出的試劑盒│↟,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘◕·。酶標包被板開封后如未用完│↟,板條應裝入密封袋中儲存◕·。
  • 各步加樣均應使用加樣器│↟,並經常校對其準確性│↟,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行│↟,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染│↟,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜◕·。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好◕·。不同批號的試劑不要混用◕·。保質前使用◕·。
  • 底物B對光敏感│↟,避免長時間暴露於光下◕·。

 

洗板方法:

1.手工洗板方法▩•·▩:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙│↟,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內│↟,浸泡1-2分鐘◕·。根據需要│↟,重複此過程數次◕·。

2.自動洗板▩•·▩:如果有自動洗板機│↟,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求▩•·▩:

1.不能檢測含NaN3的樣品│↟,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性◕·。

2.標本採集後儘早進行提取│↟,提取按相關文獻進行│↟,提取後應儘快進行實驗◕·。若不能馬上進行試驗│↟,可將標本放於-20℃儲存│↟,但避免反覆凍融◕·。

 

操作程式▩•·▩:

  • 標準品的稀釋▩•·▩:(本試劑盒提供原倍標準品一支│↟,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋◕·。)

480 pmol/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

240 pmol/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

120 pmol/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

60 pmol/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

30 pmol/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數◕·。每個標準品和空白孔建議做復孔◕·。每個樣品根據自己的數量來定│↟,能使用復孔的儘量做復孔◕·。
  • 加樣▩•·▩:1)空白孔│↟,空白對照孔不加樣品│↟,生物素標記的抗RANKL抗體│↟,鏈黴親和素-HRP│↟,只加顯色劑A&B和終止液│↟,其餘各步操作相同;2)標準品孔▩•·▩:加入標準品50ul│↟,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體│↟,故不加);3)代測樣品孔▩•·▩:加入樣本40ul│↟,然後各加入抗RANKL抗體10ul✘₪✘✘、鏈黴親和素-HRP50ul│↟,蓋上封板膜│↟,輕輕震盪混勻│↟,37℃溫育60分鐘◕·。
  • 配液▩•·▩:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用◕·。
  • 洗滌▩•·▩:小心揭掉封板膜│↟,棄去液體│↟,甩幹│↟,每孔加滿洗滌液│↟,靜置30秒後棄去│↟,如此重複5次│↟,拍幹◕·。
  • 顯色▩•·▩:每孔先加入顯色劑A50ul│↟,再加入顯色劑B50μl│↟,輕輕震盪混勻│↟,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止▩•·▩:每孔加終止液50μl│↟,終止反應(此時藍色立轉黃色)◕·。
  • 測定▩•·▩:以空白空調零│↟,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)◕·。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行◕·。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程│↟,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度◕·。也可以使用各種應用軟體來計算◕·。

 

操作程式總結▩•·▩:

試劑盒效能▩•·▩:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上◕·。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍▩•·▩:

檢測範圍▩•·▩:20 pmol/L -500 pmol/L

 

儲存條件及有效期▩•·▩:

儲存▩•·▩:2-8◕·。

有效期▩•·▩:6個月(2-8℃)◕·。

 
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