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大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數₪╃:492 釋出時間₪╃:2020/5/21
提 供 商₪╃: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小₪╃:
圖片型別₪╃: 下載次數₪╃: 135
資料型別₪╃: DOC 瀏覽次數₪╃: 492
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詳細介紹₪╃: 檔案下載    

大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)酶聯免疫

      檢測試劑盒使用說明書         

使用前仔細閱讀本說明書╃✘✘↟。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理··,來檢測大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)··,只能用於研究用途··,不得用於醫學診斷╃✘✘↟。

    ₪╃:用於大鼠血清╃☁│·、血漿及相關液體樣本中基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)測定╃✘✘↟。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)水平╃✘✘↟。向預先包被了大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)··,溫育;溫育後··,加入生物素標記的抗基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)抗體╃✘✘↟。再與鏈黴親和素-HRP結合··,形成免疫複合物··,再經過溫育和洗滌··,去除未結合的酶··,然後加入底物A╃☁│·、B··,產生藍色··,並在酸的作用下轉化成終的黃色╃✘✘↟。顏色的深淺與樣品中大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)的濃度呈正相關╃✘✘↟。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品960μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗MMP-2抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材₪╃:

  • 37恆溫箱
  • 標準規格酶標儀
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項₪╃:

  • 從2-8℃取出的試劑盒··,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘╃✘✘↟。酶標包被板開封后如未用完··,板條應裝入密封袋中儲存╃✘✘↟。
  • 各步加樣均應使用加樣器··,並經常校對其準確性··,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行··,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染··,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜╃✘✘↟。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好╃✘✘↟。不同批號的試劑不要混用╃✘✘↟。保質前使用╃✘✘↟。
  • 底物B對光敏感··,避免長時間暴露於光下╃✘✘↟。

 

洗板方法₪╃:

1.手工洗板方法₪╃:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙··,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內··,浸泡1-2分鐘╃✘✘↟。根據需要··,重複此過程數次╃✘✘↟。

2.自動洗板₪╃:如果有自動洗板機··,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求₪╃: 

1.不能檢測含NaN3的樣品··,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性╃✘✘↟。

2.標本採集後儘早進行提取··,提取按相關文獻進行··,提取後應儘快進行實驗╃✘✘↟。若不能馬上進行試驗··,可將標本放於-20℃儲存··,但避免反覆凍融╃✘✘↟。

 

操作程式₪╃:

  • 標準品的稀釋₪╃:(本試劑盒提供原倍標準品一支··,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋╃✘✘↟。)

480μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

240μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

120μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

60μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

30μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  • 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數╃✘✘↟。每個標準品和空白孔建議做復孔╃✘✘↟。每個樣品根據自己的數量來定··,能使用復孔的儘量做復孔╃✘✘↟。
  • 加樣₪╃:1)空白孔··,空白對照孔不加樣品··,生物素標記的抗MMP-2抗體··,鏈黴親和素-HRP··,只加顯色劑A&B和終止液··,其餘各步操作相同;2)標準品孔₪╃:加入標準品50ul··,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體··,故不加);3)待測樣品孔₪╃:加入樣本40ul··,然後各加入抗MMP-2抗體10ul╃☁│·、鏈黴親和素-HRP50ul··,蓋上封板膜··,輕輕震盪混勻··,37℃溫育60分鐘╃✘✘↟。
  • 配液₪╃:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用╃✘✘↟。
  • 洗滌₪╃:小心揭掉封板膜··,棄去液體··,甩幹··,每孔加滿洗滌液··,靜置30秒後棄去··,如此重複5次··,拍幹╃✘✘↟。
  • 顯色₪╃:每孔先加入顯色劑A50ul··,再加入顯色劑B50μl··,輕輕震盪混勻··,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止₪╃:每孔加終止液50μl··,終止反應(此時藍色立轉黃色)╃✘✘↟。
  • 測定₪╃:以空白空調零··,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)╃✘✘↟。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行╃✘✘↟。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程··,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度╃✘✘↟。也可以使用各種應用軟體來計算╃✘✘↟。

 

操作程式總結₪╃:

試劑盒效能₪╃:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上╃✘✘↟。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍₪╃:

檢測範圍₪╃:20μg/L -480μg/L

 

儲存條件及有效期₪╃:

儲存₪╃:2-8╃✘✘↟。

有效期₪╃:6個月(2-8℃)╃✘✘↟。

 
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